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酶標(biāo)儀國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口怎么選擇？酶標(biāo)儀怎么選購(gòu)？
2020-10-28
酶標(biāo)儀國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口怎么選擇
建議采購(gòu)進(jìn)口產(chǎn)品。國(guó)產(chǎn)產(chǎn)品不能測(cè)讀384孔板進(jìn)口產(chǎn)品精確度好，穩(wěn)定性高，可測(cè)讀384孔板。
酶標(biāo)儀方法與原理
1.1濾光片波長(zhǎng)精度檢查及其峰值測(cè)定
1.1.1方法及其衡量的標(biāo)準(zhǔn)：用高精度紫外可見分光光度計(jì)（波長(zhǎng)精度±0.3nm）對(duì)不同波長(zhǎng)的濾光片進(jìn)行光譜掃描，檢測(cè)值與標(biāo)定值之差即為濾光片波長(zhǎng)精度，其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質(zhì)量越好，波長(zhǎng)精度越高。
1.1.2理論基礎(chǔ)：酶標(biāo)儀的濾光片質(zhì)量好壞，直接影響儀器的靈敏度高低，而濾光片的質(zhì)量又是以其波長(zhǎng)精度及其峰值指標(biāo)來(lái)衡量的，因此濾光片波長(zhǎng)精度及峰值是衡量酶標(biāo)儀的重要參數(shù)之一，這在廠家的儀器說(shuō)明書中雖未曾提及，但在儀器的實(shí)際使用過程中，我們發(fā)現(xiàn)對(duì)濾光片波長(zhǎng)精度和峰值進(jìn)行檢查是重要的也是必要的，通過檢查可以發(fā)現(xiàn)濾光片的波長(zhǎng)標(biāo)定值與實(shí)測(cè)值的符合程度，可以發(fā)現(xiàn)濾光片的質(zhì)量是否符合要求。
1.2靈敏度和準(zhǔn)確度的監(jiān)測(cè)
1.2.1方法：①靈敏度：精確配制6ug/ml重鉻酸鉀（干燥）溶液（0.05mo1／L硫酸溶解），加入200ul重鉻酸鉀溶液于小孔杯中，以0.05mo1／L硫酸溶液作空白，于450nm（參比波長(zhǎng)650nm）測(cè)定，其吸光度應(yīng)≥0.01A。②準(zhǔn)確度：準(zhǔn)確配制：1mmo/L對(duì)硝基苯酚（提純品）水溶液，然后以10mmo1／L氫氧化鈉溶液25倍稀釋之，加入200ul稀釋液于小孔杯中，以10mmo1／LNaOH溶液作空白，于405nm（參比波長(zhǎng)650nm）檢測(cè)，其吸光度應(yīng)在0.4A（0.395～0.408A）左右。
1.2.2說(shuō)明：儀器的靈敏度和準(zhǔn)確度主要受兩個(gè)因素影響：一是濾光片波長(zhǎng)的精度，二是檢測(cè)器的質(zhì)量。通常情況下，濾光片原因?qū)е聝x器的靈敏度和準(zhǔn)確度下降比較容易檢查；而檢測(cè)器質(zhì)量差異則不易被發(fā)現(xiàn)，因此我們采用上述兩種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液對(duì)儀器檢測(cè)器的質(zhì)量進(jìn)行定期監(jiān)測(cè)，從而保證了儀器檢測(cè)結(jié)果的可靠性。對(duì)于儀器準(zhǔn)確性的測(cè)定，我們采用了文獻(xiàn)報(bào)道的方法，經(jīng)過多次在不同型號(hào)儀器間進(jìn)行反復(fù)測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該標(biāo)準(zhǔn)物溶液在450nm波長(zhǎng)處有一較為恒定的測(cè)定值，由于酶標(biāo)儀與其它分光光度計(jì)的光學(xué)原理不完全相同，故是否可以作為評(píng)價(jià)酶標(biāo)儀準(zhǔn)確性的參考方法還有待同行進(jìn)一步研究考證。
1.3通道差與孔間差檢測(cè)
1.3.1方法及其表達(dá)方式：①通道差檢測(cè)：取一只酶標(biāo)板小孔杯（杯底須光滑、透明、無(wú)劃痕、無(wú)污染）以酶標(biāo)板架作載體，分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液200ul先后置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)（測(cè)定波長(zhǎng)490nm，參比波長(zhǎng)630或650nm，以下均相同）連續(xù)測(cè)三次，觀察其不同通道之間測(cè)量結(jié)果的一致性可用極差值來(lái)表示其通道差。②孔間差的測(cè)量：選擇同一廠家、同一批號(hào)酶標(biāo)板條（8條共96孔）分別加入200ul甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.065～0.070A）先后置于同一通道，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)檢測(cè)，其誤差大小用±1.96s衡量。
1.3.2理論解釋：為了提高酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度，根據(jù)96孔酶標(biāo)板的規(guī)格特點(diǎn)，目前大多數(shù)廠家的中、高檔酶標(biāo)儀均采用8通道的檢測(cè)器（部分中、低檔酶標(biāo)儀目前仍采用單通道）．因而它們每個(gè)通道的檢測(cè)能力是不盡相同的，它是儀器內(nèi)部的固有誤差，與所測(cè)溶液濃度成正相關(guān)（不同檢測(cè)器對(duì)不同濃度溶液的響應(yīng)能力不同），所以通道差是衡量酶標(biāo)儀性能良好與否的重要指標(biāo)之一；其衡量指標(biāo)用極差表示，這與廠家推薦的指標(biāo)是一致的；極差值越接近于零，通道差越小，說(shuō)明同一樣品于不同通道檢測(cè)結(jié)果的一致性越好。
由于不同廠家、不同批號(hào)酶標(biāo)板之間的質(zhì)量差異，導(dǎo)致孔與孔之間的檢測(cè)結(jié)果也不完全一致，這與水平光路光度計(jì)的比色皿質(zhì)量是否符合要求一樣，因此我們認(rèn)為孔間差是儀器外部的固有誤差，只有準(zhǔn)確測(cè)知孔間差，并對(duì)結(jié)果作出相應(yīng)的校正，才能使檢驗(yàn)結(jié)果更符合實(shí)際情況、更準(zhǔn)確可靠；采用的評(píng)價(jià)指標(biāo)（士1.96s）也是有利于結(jié)果校正的。另外，在設(shè)計(jì)孔間差測(cè)量的操作方法上，我們將200ul甲基橙溶液吸光度調(diào)至0.065～0.070A，是充分考慮到加樣器的誤差（上海求精公司，200ul，士2％CV），其目的是使加樣誤差控制在儀器的分辨率（0.01A）以下，這樣也就避免了孔間差結(jié)果不因加樣誤差而導(dǎo)致假性增高。
1.4零點(diǎn)飄移
1.4.1方法：取八只小孔杯，分別置于八個(gè)通道的相應(yīng)位置，均加入200ul蒸餾水并調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)或單波長(zhǎng)（490nm）每隔30min測(cè)定一次，觀察8個(gè)通道4h內(nèi)的吸光度變化。其與零點(diǎn)的差值即為零點(diǎn)飄移。
1.4.2測(cè)量原理：酶標(biāo)儀的零點(diǎn)飄移通常是很小的，這是由于儀器在讀數(shù)之前，先要做8個(gè)通道的本底測(cè)量（Io）．然后再讀取樣品板的各孔測(cè)定值（I），根據(jù)Beer'slaw光吸收值=1ogl0（Io／I），每次讀數(shù)經(jīng)過如此的自動(dòng)校正，使得讀數(shù)誤差大大降低，這樣的測(cè)讀方式無(wú)疑是非常正確的的；另外有的儀器是應(yīng)用"DRLDYE"檢測(cè)試條來(lái)進(jìn)行絕對(duì)吸光度的校準(zhǔn)的，因此在采用單波長(zhǎng)測(cè)量時(shí)，會(huì)導(dǎo)致吸光度的假性增高，這種儀器可采取兩種方法進(jìn)行校正，一是選擇一合適的參比濾光片進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定，二是引入修正參數(shù)，即在吸光度模式下單波長(zhǎng)讀取1個(gè)空白孔，其測(cè)試值和預(yù)測(cè)值之差值即為修正參數(shù)。所以零點(diǎn)飄移是評(píng)價(jià)儀器在一定時(shí)間內(nèi)零點(diǎn)吸光度的變化趨勢(shì)，與波長(zhǎng)無(wú)關(guān)，它間接地反映了儀器內(nèi)部檢測(cè)系統(tǒng)在單位時(shí)間內(nèi)處于工作狀態(tài)下的穩(wěn)定性及儀器的機(jī)械性能情況（連續(xù)進(jìn)板、檢測(cè)、退出），故它是評(píng)估儀器內(nèi)部電路系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)（檢測(cè)器）及機(jī)械系統(tǒng)良好與否的指標(biāo)。
1.5精密度評(píng)價(jià)
1.5.1方法及評(píng)價(jià)指標(biāo)：每個(gè)通道三只小杯，分別加入200ul高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)作雙份平行測(cè)定，每日測(cè)定兩次，連續(xù)測(cè)定20天。分別計(jì)算其批內(nèi)精密度、日內(nèi)批間精密度、日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV值。
1.5.2理論依據(jù)：1984年美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)發(fā)表了EP5一T文件并于1992年進(jìn)行了第二次修訂：臨床化學(xué)儀器精密度性能的用戶評(píng)價(jià)。該評(píng)價(jià)方案在生化分析儀、血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀等儀器和試劑的評(píng)價(jià)中得到了廣泛的應(yīng)用，使評(píng)價(jià)儀器的方法得到了統(tǒng)一；而該法應(yīng)用于酶標(biāo)儀的評(píng)價(jià)在國(guó)內(nèi)外則尚未見有類似的報(bào)道，我們采用該法對(duì)酶標(biāo)儀進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，結(jié)果是比較滿意的。各指標(biāo)的意義為：批內(nèi)精密度系由20d中每天兩批，每批兩次之差（即"批內(nèi)"）經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后所得的結(jié)果；日內(nèi)批間精密度系由20d中每天兩批測(cè)定結(jié)果均值之差（即"批間"）經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后所得的結(jié)果；日間精密度表示20d中每天所測(cè)均值的標(biāo)準(zhǔn)差即標(biāo)準(zhǔn)誤，反映了每日均值的離散度；總精密度則是對(duì)批內(nèi)、批間和日間精密度進(jìn)行加權(quán)統(tǒng)計(jì)的結(jié)果。其中以批內(nèi)精密度和總精密度的應(yīng)用最為廣泛，與傳統(tǒng)的批內(nèi)精密度的計(jì)算方法（即對(duì)同一標(biāo)本在同一天內(nèi)同時(shí)重復(fù)測(cè)定多次）相比，前者更符合實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況，更有代表性，也更加合理；而總精密度則客觀地全面地反映了實(shí)驗(yàn)室的總體變異情況。
1.6線性測(cè)定
1.6.1方法：精確稱取甲基橙配制5個(gè)系列濃度的溶液，采用雙波長(zhǎng)平行檢測(cè)8次求其均值。計(jì)算回歸方程、相關(guān)系數(shù)r及標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)誤差Sy,x，并用±1.96Sy,x表示樣品的95％測(cè)量范圍。
1.6.2評(píng)價(jià)指標(biāo)解釋：線性測(cè)定也是評(píng)價(jià)儀器的重要手段之一，因?yàn)樗莾x器開展定量工作的基礎(chǔ)和前提，某些廠家用標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)誤差s來(lái)衡量線性，這與實(shí)驗(yàn)室通常所采用的相關(guān)系數(shù)r是一致的，因此在進(jìn)行線性評(píng)估時(shí)，我們同時(shí)報(bào)告r和Sy,x，目的是為了增強(qiáng)用戶與廠家之間的可比性。
1.7雙波長(zhǎng)評(píng)價(jià)
1.7.1方法：在運(yùn)用酶標(biāo)儀檢測(cè)樣品時(shí)，由于溶液中的小氣泡、杯底的水紋印及劃痕、小孔杯之間透明度的差異等等，這些都是儀器測(cè)定過程中最常見的干擾因素，而標(biāo)本中的干擾組份（如溶血、黃道）因洗滌而對(duì)測(cè)定結(jié)果影響則較小，因此我們將文獻(xiàn)中的雙被長(zhǎng)評(píng)價(jià)方法改為：取同一廠、同一批號(hào)酶標(biāo)板條（每個(gè)通道2條共24孔）每孔加入200ul甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.065～0.070A）先后于8個(gè)通道分別采用單波長(zhǎng)（490nm）和雙波長(zhǎng)（測(cè)定波長(zhǎng)490nm、參比波長(zhǎng)630／650nm）進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果的均值、離散度，比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異以考察雙波長(zhǎng)清除干擾因素的效果。
1.7.2說(shuō)明：雙波長(zhǎng)測(cè)定過程中，由于標(biāo)本中干擾組份的存在以及小孔杯本身質(zhì)量等原因，常常導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的假性增高，而酶標(biāo)儀提供的雙波長(zhǎng)測(cè)定功能則可以消除干擾組份或因素對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響．對(duì)于標(biāo)本中干擾組份的清除，在選擇參比波長(zhǎng)時(shí)，我們應(yīng)對(duì)于擾組份的光譜進(jìn)行研究，以正確選擇參比波長(zhǎng)；而對(duì)于小孔杯本身質(zhì)量問題等干擾因素的消除，只要選擇遠(yuǎn)離測(cè)定波長(zhǎng)的參比波長(zhǎng)即可以了、這對(duì)保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性是非常重要的。
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